Come analizzare gel elettroforesi

Come analizzare gel elettroforesi


L'elettroforesi è il movimento delle molecole basate su carica elettrica. Sfruttando la porosità del gel di agarosio e il fatto che il DNA ha una spina dorsale fosfato di carica negativa, gli scienziati possono separare frammenti di DNA dal formato su un gel di agarosio applicando una corrente ad esso. I formati differenti di frammenti di correre a velocità diverse; piccoli frammenti muoversi più velocemente attraverso il gel di grandi frammenti. Determinazione delle dimensioni di una molecola dalla separazione di esso da altri frammenti molecolari aiuta scienziati in esperimenti genetici e proteomica.

istruzione

1 Indossare i guanti di nitrile.

2 trasferire con cautela il gel dalla casella di gel alla casella fonte di luce UV. gel di agarosio può strappare o rompere, in modo che quando si trasferisce il gel, trasferirlo su un oggetto piatto e solido come un foglio di plastica dura.

3 Indossare gli occhiali a prova di raggi UV.

4 Accendere la sorgente di luce UV.

5 Scatta una foto del gel con la fotocamera.

6 Stampa la foto.

7 Annotare le dimensioni note delle bande frammento nella corsia scala in base alla chiave dalla scala si è utilizzato direttamente sulla foto.

8 Determinare la dimensione relativa delle bande nelle corsie del campione.

9 Confrontare la dimensione del gruppo previsto con la dimensione banda misurata. Se corrisponde, la vostra reazione a catena della polimerasi (PCR) o reazione enzimatica lavorato. In caso contrario, controllare i primer o plasmidi una seconda volta e confermare il formato previsto. Se la band è ancora un mistero e si ripete, prendere in considerazione l'invio di quel pezzo di gel per un impianto di sequenziamento del DNA per l'analisi.

Consigli e avvertenze

  • C'è spesso una banda composta da primer sul fondo di corsie su un gel elettroforesi etidio bromuro. Questa non è una banda di DNA replicato e dovrebbe essere ignorato.
  • Esecuzione di gel lento tende a dare fasce più puliti. Per fare questo, ridurre la corrente sulla scatola gel. Se i risultati del gel devono essere pubblicati, eseguire il gel a bassissimo overnight corrente.
  • Quando si maneggiano gel contenenti bromuro di etidio, indossare sempre guanti di nitrile. Etidio bromuro è una piccola molecola e può passare attraverso lattice.
  • Non usare mai candeggina per pulire una zona che è stato contaminato con bromuro di etidio. Bleach reagisce con bromuro di etidio e produce prodotti di reazione estremamente pericolosi.
  • Leggi la scheda di sicurezza (SDS) per etidio bromuro prima di lavorare con esso.